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无内毒素质粒DNA大量提取试剂盒
无内毒素质粒DNA大量提取试剂盒采用SDS/碱裂解法释放质粒DNA，选择性吸附质粒DNA去除绝大部分内毒素，高盐离子洗脱，进一步分相去除残留的内毒素，异丙醇沉淀回收质粒DNA，可根据实验需要决定DNA溶解体积。
DNA吸附柱-扩容管在负压装置上完成吸附DNA过程，实现了大体积溶液转小管操作，即后续步骤使用1.5-2 ml离心管操作；以平行处理4个样品为例，操作时间约150 min。
处理菌液体积与产量：100-200 ml 含高拷贝质粒的LB菌液，产量为1-2 mg质粒DNA。
200-400 ml 含低拷贝质粒的LB菌液，产量50-200 μg质粒DNA。
质量与应用：内毒素含量低于6 EU/mg质粒DNA，以超螺旋构型为主，无RNA与基因组DNA残留，可用于细胞转染与DNA疫苗。
附:鲎试剂凝胶法检测内毒素
规格：0.1 ml 灵敏度：0.06 EU/ml 检测下限：0.006 EU/支（购自厦门市鲎试剂实验厂有限公司）
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检测组 |
37℃正立放置1小时，观察凝胶形态 |
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1. 阴性对照：100 μl无内毒素水 |
液态：材料与操作过程无内毒素污染 固态：材料或操作过程有内毒素污染，实验数据无效 |
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2. 阳性对照：用无内毒素水配制标准品至0.25 λ(0.06 EU/ml)，100 μl |
液态：鲎试剂失效，实验数据无效 固态：鲎试剂有效，达到预期灵敏度 |
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3. 干扰测试：1-2 μg 质粒DNA与0.25 λ标准品混合，100 μl |
液态：鲎试剂失效或检测样品干扰凝胶反应，实验数据无效 固态：检测样品不影响凝胶反应 |
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4. 检测样品：1-2 μg 质粒DNA加无内毒素水至100 μl |
液态：内毒素含量<0.006 EU/μg DNA (6 EU/mg DNA) 固态：内毒素含量>0.006 EU/μg DNA (6 EU/mg DNA) |
通常使用本试剂盒提取的质粒DNA检测量为1-4 μg，无凝集反应。
